Investigación Básica

Inicio

Fin

Director-

Codirector

Tesista

Tema

2002

2007

Nelva Tacconi

Angel Catala

Natalia Lausada

Estudio del metabolismo lipídico de ratas con trasplante renal y de células de hepatoma humano (HEPG2) bajo el tratamiento con distintos inmunosupreores

2006

2011

Pedro Gonzalez

J. C. Raimondi

Ana Carolina del Pozo

Estudio Experimental de la Isquemia-Reperfusión Hepática

2007

 

Pedro Gonzales

J.Clemente Raimondi

Efecto del precondicionamiento isquémico y la administración de lidocaína en ratas portadoras de hígados grasos

2009

2014

Natalia Lausada

Mariana Machuca

Méd. Veterinario

Pablo Stringa

Efecto del precondicionamiento isquémico en la injuria intestinal local y remota en modelos microquirúrgicos de isquemia-reperfusión y trasplante de intestino en ratones

2012

 

Néstor Carri

Natalia Lausada

Lic. en Cs. Biológicas Ana María Cruz Gaitán

Estudio del desarrollo neuronal in vitro. Proteínas morfogenéticas que interrumpen la quiescencia y promueven la diferenciación del linaje glioneuronal en células en desarrollo. Análisis trófico y el perfil inmunoreactivo para marcadores de fenotipo

2012

 

Néstor Carri

Natalia Lausada

Lic en Cs. Biológicas Jimena Pía Fernandez

Desarrollo neuronal en modelos embrionarios del sistema retinotectal y cerebro. Estudio trófico e inmunoreactivo

2013

2014

M. Socolowsky

Natalia Lausada

Médico Jorge Bustamante

Estudio comparativo de la reparación del sistema nervioso periférico con técnicas microquirúrgicas experimentales de sutura epineural en condiciones de distinto grado de tensión

2016

 

Natalia Lausada

Mariana Machuca

Leandro Vecchio

Dezillio

Impacto de la muerte encefálica en la injuria por isquemia-reperfusión y rechazo celular agudo en un modelo experimental de trasplante de intestino en ratas

2017

 

Natalia Lausada

Nathalie Arnal

Juan Cruz Abate

Efectos del Precondicionamiento Isquémico Abdominal Multiorgánico ante la injuria por isquemia-reperfusión en modelos experimentales de trasplante

 

Modelo de isquemia y reperfusión en hígado de rata aislado

Tiene como objetivo poder valorar el grado de lesión isquémica del hígado durante la reperfusión y su prevención con diferentes tipos de drogas que bloquean la producción de radicales libres. Se llevó a cabo en el Laboratorio de Trasplante de Órganos y con la participación de las Cátedras "B" de Histología, Farmacología, Bioquímica y el Laboratorio de Análisis Clínicos de la Facultad de Ciencias Veterinarias. Producto de los trabajos realizados en el inicio surgieron publicaciones internacionales (55-56)

 

Trasplante hepático en la rata

Su objetivo es proyectar la experiencia del modelo producido con hígado aislado en otro modelo que brinde una mayor semejanza a las condiciones clínicas. Se llevó a cabo en el Laboratory of Experimental Surgery de la Universidad de Western Ontario, Canadá, dónde además se adquirió la destreza para realizar también trasplante cardíaco y renal en la rata de laboratorio, para continuar a partir de noviembre de 1998 de en el Laboratorio de Trasplante de Órganos. Cabe destacar que estas técnicas se utilizan actualmente en varios proyectos de investigación. La experiencia de aprendizaje fue divulgada en una publicación internacional. (64-65)

Dando continuidad a estas líneas, desde el año 2012 y en la actualidad participamos como integrantes en el PICT 2012-2530: Optimización en la aplicabilidad de trasplante de órganos incrementando el número de potenciales órganos mediante la utilización de estrategias que disminuyan el daño por isquemia-reperfusión. Trabajo en colaboración con el Instituto de Trasplante Multiorgánico de Trasplante, Fundación Favaloro y el Instituto de Criobiología de la Universidad Nacional de Rosario.

 

Lesión por isquemia y reperfusión hepática en la rata

La lesión por isquemia-reperfusión impacta negativamente sobre la función inicial del injerto. En este Proyecto se aplicó un modelo de isquemia tibia por clampeo de la vena porta con intervalos variables en la rata de laboratorio con posterior reperfusión. Posteriormente, se evaluó una estrategia protectora con lidocaína, droga de bajo peso molecular la cual obstruye el poro por el cual entra sodio a la célula. Lo que en realidad ocurre es una interacción de la molécula de Lidocaína con parte del canal interfiriendo en la apertura de sus compuertas. La evaluación se realizó por marcadores séricos de estrés oxidativo y microscopía óptica del tejido hepático. Los resultados han sido muy alentadores en cuanto a la protección ante la injuria isquémica en el modelo experimental en ratas y se desprenden del desarrollo de la tesis doctoral. De Ana Carolina del Pozo "Estudio Experimental del la Isquemia-reperfusión hepática", 2011.

 

Trasplante hepático en cerdos

Este proyecto tuvo el doble objetivo de desarrollar en el animal el modelo del trasplante hepático clínico y a la vez extrapolar los resultados obtenidos en los dos proyectos anteriores en un modelo similar al humano. Se llevó a cabo en una primera etapa en el Laboratorio de Trasplante de Órganos con la participación de la Cátedra-Servicio de Cirugía de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la U.N.L.P. Habiéndose superado la primera fase de obtención de supervivencia y a pesar de tener el modelo desarrollado, la actividad tuvo que ser interrumpida por la crisis económica del año 2001. Este proyecto que estaba acreditado con subsidio del Programa de Incentivos puede ser retomado para su aplicación en investigaciones. Actualmente las líneas de investigación se llevan a cabo en roedores de laboratorio.

 

Estudio de la segmentación hepática en el cerdo

Tuvo como objetivo establecer las bases anatómicas para desarrollar el trasplante hepático segmentario en un modelo similar al descripto en el humano. Es motivo de otro proyecto denominado Trasplante Hepático Segmentario en el Cerdo con objetivos similares al anterior. Se llevó a cabo en el Laboratorio de Trasplante de Órganos con la participación de la Cátedra de Anatomía III.

 

Estudio experimental y clínico del metabolismo lipídico en ratas tratadas con drogas inmunosupresores y en pacientes con insuficiencia renal crónica en hemodiálisis y trasplantados renales

El objetivo de estos estudios es establecer la acción de drogas inmunosupresoras sobre el metabolismo lipídico, y en particular sobre la biosíntesis de los ácidos grasos polinosaturados, en ratas y en pacientes con función renal no comprometida, en insuficiencia renal crónica en hemodiálisis y en trasplantados renales. La terapia esteroidea post - trasplante en humanos representa un factor de riesgo aterogénico que incrementa la morbi-mortalidad de estos pacientes. Por otro lado la insuficiencia renal crónica va asociada a alteraciones lipídicas en el plasma y en membranas de glóbulos rojos que comprometen aún más la evolución de estos enfermos. (57-59)

Una vez que finalizó esta primera etapa se ampliaron y profundizaron los estudios en el modelo de trasplante renal en la rata desarrollado en el Laboratory of Experimental Surgery de la Universidad de Western Ontario, Canadá. Los mismos se describen a continuación.

 

Estudio del metabolismo lipídico de ratas con trasplante renal y de células de hepatoma humano (HepG2) bajo el tratamiento con distintos inmunosupresores

Los desórdenes lipídicos en pacientes con trasplante renal juegan un rol importante en la patogénesis del rechazo del órgano implantado y en la ateroesclerosis generalizada. La influencia de las terapias inmunosupresoras sobre el perfil lipídico no es aun totalmente conocida, ya que se utilizan esquemas de inmunosupresión combinando drogas inmunosupresoras. El objetivo del trabajo fue evaluar el efecto que producen distintos inmunosupresores individualmente, sobre el metabolismo lipídico en ratas sometidas a trasplante renal y en células de hepatoma humano. Se evaluaron: ratas receptoras de trasplante renal tratadas con ciclosporina A, sirolimus y metilprednisona, ratas trasplantadas sin tratar y ratas control. Se evaluó, además, la composición de ácidos grasos celulares totales y la incorporación y metabolismo de ácidos grasos marcados en una línea de células de hepatoma humano tratada con ciclosporina A y sirolimus. Los resultados revelaron que los inmunosupresores utilizados incrementan los lípidos séricos. Respecto a los lípidos de membrana se observó un patrón de deficiencia de ácidos grasos polinosaturados con un incremento de los ácidos grasos saturados analizados por cromatografía-gas líquido, más acentuado en el lote tratado con esteroides. En los lípidos totales, analizados por cromatografía en capa fina, se observó un descenso de los fosfolípidos a expensas del incremento del colesterol, estudiado en las membranas microsomales renales. Del análisis in-vitro se desprende que las drogas ciclosporina A y sirolimus provocan un descenso de la actividad 9 desaturante con un incremento de la actividad de las 6 y 5 desaturasas. El conocimiento del impacto que sobre los lípidos ejercen los nuevos inmunosupresores, podría ser utilizado para establecer estrategias en el manejo del paciente trasplantado, a fin de prevenir el infarto agudo de miocardio, principal causa de fallecimiento de estos pacientes y la pérdida de riñones trasplantados por ateroesclerosis generalizada de los mismos. Ver tesis Natalia Lausada (66-68 )

 

Modelo de diagnóstico de muerte bajo criterios neurológicos en la rata

El modelo experimental de trasplante de órganos y tejidos en la rata, se ha llevado a cabo tradicionalmente con donante vivo. La complejidad de lograr un donante cadavérico en roedores de laboratorio, ha restringido su utilización. Esta situación limita la extrapolación de los resultados a la realidad clínica, donde mayoritariamente se utilizan órganos extraídos de donantes cadavéricos. La necesidad de poseer resultados experimentales, tanto en donante vivo como cadavérico, nos ha llevado a optimizar el modelo de donante de órganos en rata con criterio neurológico de muerte y asistencia respiratoria mecánica. Para el mantenimiento del animal (ratas de laboratorio), se utilizó un respirador neonatal (Rosch RN2), se colocan cánulas arteriales para medir tensión arterial media y venosas para la administración de fluidos, se registra la fisiología pulmonar (frecuencia, volumen y presiones adecuadas) se simula un derrame epidural. El diagnóstico de muerte encefálica se evaluó con la pérdida de los reflejos corneal y la midriasis posteriormente a la insuflación del balón, que luego se confirma con el test de apnea. Este trabajo ameritó la obtención de dos distinciones: Premio al mejor trabajo presentado por estudiantes llevado a cabo por el Ayudante Alumno Sr. Gustavo Zalazar; Distinción al mejor trabajo científico del Congreso Argentino de Trasplante, 2011; y una publicación internacional que resume estos antecedentes. (69)

Actualmente la continuidad de esta línea se encuentra a cargo del Médico Veterinario Leandro Vecchio Dezillio Becario de Iniciación a la Investigación Universidad Nacional de La Plata bajo la dirección de la Dra. Natalia Lausada y la Codirección del Dr. Martín Rumbo. Así mismo bajo el plan de trabajo titulado: Impacto de la muerte encefálica en la injuria por isquemia-reperfusión y rechazo celular agudo en un modelo experimental de trasplante de intestino en ratas, constituye su tema actual de tesis doctoral en ejecución. El tesista ha sido beneficiado para realizar una estadía en la Universidad Medish Centrum Groningen, bajo la dirección del Dr. Leuvenink, a través del Programa de Becas de Formación en Ciencia y Tecnología BEC.AR en enero 2018.

 

Lesión por isquemia y reperfusión renal en la rata

Este evento ha sido estudiado por nuestro grupo en dos modelos de trasplante renal: autotrasplante e isotrasplante renal. Numerosos artículos citan al trasplante isogénico en ratas como el modelo quirúrgico más apropiado para el estudio de estas lesiones debido a que el factor de daño inmunológico no se encuentra. Sin embargo, estas cepas presentan un 1.6% de heterocigosis residual. El modelo de autotrasplante ha sido escasamente reportado por su complejidad microquirúrgica. La descripción de esta técnica fue desarrollada con éxito por nuestro grupo. Posteriormente, se continuó esta línea de trabajo en el isotrasplante renal probando estrategias que atenúen el daño por IRI desde el donante. Una de la hipótesis de trabajo fue al administrar drogas antiinflamatorias e insumosupresoras al animal donante para conferir protección desde la fase isquémica y una atenuación en la lesión post- reperfusión en el receptor. La injuria por isquemia-reperfusión impacta negativamente en la calidad del injerto renal. Producto de esta línea de investigación se ha obtenido el premio al mejor trabajo del X Congreso de la Sociedad Argentina de Trasplante: "Efectos beneficiosos de drogas inmunosupresoras administrada al donante en modelo de ratas isogénicas en trasplante renal", 2009. Además de tres trabajos científicos en revistas internacionales. (70-72)

 

Modelo experimental de hígado graso en el donante para trasplante hepático

Cuando se realiza un trasplante hepático con un donante de criterios expandidos por esteatosis, la misma se puede asociar a una función inicial pobre o a la no-función primaria del injerto. Existe un debate sobre la relevancia y el impacto de microesteatosis vs la macroesteatosis hepática. El proyecto de esteatosis hepática en la rata de laboratorio evalúa diferentes dietas o variaciones genéticas como la mutación para el receptor de leptinas, que permiten establecer un modelo de hígado graso experimental extrapolable a la problemática clínica. Al estudiar de manera exhaustiva este fenómeno, hemos sido convocados para disertar sobre en el tema y la difícil obtención de un modelo experimental extrapolable al trasplante hepático humano con donantes portadores de hígado graso en la rata. (73)

 

Lesión por isquemia y reperfusión intestinal en la rata

La injuria por isquemia-reperfusión impacta negativamente en la calidad del injerto intestinal. Para estudiar este fenómeno en un modelo libre de estimulación antigénica se utilizó inicialmente un procedimiento de isquemia tibia (clampeo de arteria mesentérica superior en ratones) donde se determinó el tiempo crítico de tolerancia a la isquemia intestinal en esa especie, posteriormente se evaluaron diferentes protocolos de pre-condicionamiento isquémico (PCI) y pre-tratamiento con la droga inmunosupresoras. Además del tejido intestinal se evaluaron órganos remotos susceptibles. Se desarrolla en colaboración con la Fundación Favaloro. En este tema trabajó un becario CONICET, Pablo Stringa, y finalizó con su tesis doctoral ver tabla 1. (74-76)

 

Estudio comparativo de la reparación del sistema nervioso periférico con técnicas microquirúrgicas experimentales de sutura epineural en condiciones de distintos grados de tensión

En la práctica médica diaria se tratan pacientes con lesiones en nervios periféricos que lejos están de reunir las condiciones ideales para realizar una sutura primaria del nervio dañado. La falta de tejido nervioso o la formación de un neuroma que amerita su resección, nos deja frente a una situación médico-quirúrgica en la que se debe reparar un segmento nervioso donde muchas veces resulta imposible la realización de una sutura primaria. En la reparación de los nervios periféricos se buscan permanentemente nuevas estrategias. El Proyecto de evaluación experimental de la sutura a tensión en pérdida significativa de tejido nervioso periférico se llevó a cabo en el Laboratorio de Trasplante y arrojó como resultado la producción científica de la Tesis Doctoral de Jorge Bustamante (2015), quien participó también en la publicación de un libro y la autoría de un trabajo científico. (77-78)

 

Inducción del daño pulmonar por ventilación mecánica

La ventilación mecánica per se puede ser responsable de la inducción de daño pulmonar agudo en órganos previamente sanos o agravar lesiones en pulmones ya lesionados. Debido a que están poco claras las recomendaciones existentes acerca del patrón ventilatorio a utilizar, y a cómo debe modificarse este patrón según las condiciones hemodinámicas del paciente, el empleo de un seteo ventilatorio no adecuado podría estar favoreciendo o perpetuando la aparición de lesión pulmonar aguda en el período inmediato al soporte ventilatorio del pulmón aún en ausencia de otros factores conocidos. El modelo de estudio in vivo de injuria pulmonar en ratas permite controlar de forma muy estrecha todas las variables ventilatorias y hemodinámicas, de manera que su uso será muy útil para poder definir un patrón ventilatorio en combinación con una modulación de la respuesta inflamatoria, que permitan minimizar los problemas de lesión pulmonar derivados de la ventilación mecánica tanto en pulmones sanos, como en pulmones con lesión ya instaurada (como es el caso de los pacientes críticos). Como objetivo nos proponemos determinar la influencia de la ventilación mecánica sobre la aparición de lesión pulmonar aguda en un modelo experimental de pulmón sano de injuria pulmonar in vivo de rata, donde se ha inducido una lesión pulmonar aguda por volutrauma (volumen corriente excesivamente elevado) y estudiar la modulación en el proceso inflamatorio de la lesión pulmonar aguda inducida por la ventilación mecánica con la manipulación farmacológica de una droga anti inflamatoria. (79)

 

Bioquímica de lípidos y estrés oxidativo en enfermedades degenerativas crónicas.

El Proyecto 11-M175 vigencia 2014-2017 es Dirigido por la Dra. Natalia Lausada. El mismo está integrado por un conjunto de subproyectos que están a cargo de diferentes integrantes del Programa de Incentivos. En breve, se plantea investigar el rol del metabolismo de lípidos y del sistema de defensa antioxidante en la etiopatogenia, evolución, prognosis, prevención o tratamiento de enfermedades crónicas como la diabetes mellitus tipo 2, enfermedades neurodegenerativas de causa idiopática o provocada por noxas endógenas o exógenas y que involucran al mal de Alzheimer, demencias vasculares o infarto isquémico cerebral. Además estas técnicas de estudio del daño oxidativo y nitrativo, llevadas a cabo en el Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata (INIBIOLP) se aplica a los modelos experimentales de trasplante de órganos que se desarrollan en el Laboratorio de Trasplante de Órganos. (80)

 

Proyecto de inicio en 2017

Precondicionamiento Isquémico como estrategia para mejorar la calidad de injertos uterinos para Trasplante.

Becas de Estímulo a las Vocaciones Científicas 2016. Consejo Interuniversitario Nacional (BECAS CIN). Becaria Alumna Mercedes Tarzia. Dirección de beca Dra. Natalia Lausada Codirección Dr. Pablo Stringa

Los modelos de trasplante y toda técnica quirúrgica compleja en roedores de laboratorio se llevan a cabo con el uso de elementos de magnificación por eso se denominan técnicas de microcirugía experimental. El presente plan postula a una alumna avanzada para la ejecución del mismo. No obstante, es imprescindible la participación del Codirector en el acompañamiento y supervisión de la candidata. El Dr. Pablo Stringa utiliza en sus líneas de investigación el modelo más complejo de trasplante en la rata que es el trasplante de intestino. Esta experiencia motiva el trabajo en conjunto con la postulante para llevar adelante técnicas de disección en la rata, clampeo del pedículo vascular uterino y revascularización del mismo. Estos procedimientos sentarán además las bases para la continuidad en el trasplante de útero experimental en un futuro inmediato, al contar con más operarios entrenados

 

Efectos del Precondicionamiento Isquémico Abdominal Multiorgánico ante la injuria por isquemia-reperfusión en modelos experimentales de trasplante

Plan de tesis doctoral del Médico Juan Cruz Abate presentada a consideración para su ejecución en el próximo año. Dirigida y Codirigida por las Dras. Natalia Lausada y Nathalie Arnal. El motivo de la realización de este plan de trabajo es continuar estudiando la injuria por isquemia-reperfusión (IIR) en el área de los trasplantes de órganos. A partir de esta problemática particularmente relacionada a los trasplantes de órganos y teniendo la certeza de que el precondicionamiento isquémico (consistente en exponer al órgano en cuestión a períodos cortos de isquemia seguidos de períodos de reperfusión previo a episodios de isquemia prolongada, mediante el clampeo reversible de la vasculatura que nutre al órgano de interés) es una estrategia probada para atenuar esta IIR. Se decide emplear la misma con la particularidad de preacondicionar hígado, riñón e intestino en forma multiorgánica a diferencia de la experiencia recabada en publicaciones científicas actuales donde se demostró su utilidad aplicada pero sólo en forma individual a cada órgano.